转录因子FOXD1的新用途[发明专利]

(12)发明专利申请

(10)申请公布号 CN 105838820 A(43)申请公布日 2016.08.10

(21)申请号 201610390352.1(22)申请日 2016.06.02

(71)申请人 北京市神经外科研究所

地址 100050 北京市东城区天坛西里6号(72)发明人 赵澎　张亚卓　李储忠　白吉伟　

桂松柏　王红云　李丹　何乐　刘潜　(74)专利代理机构 北京中誉威圣知识产权代理

有限公司 11279

代理人 孟祥斌　李红伟(51)Int.Cl.

C12Q 1/68(2006.01)G01N 33/68(2006.01)G01N 33/574(2006.01)A61K 45/00(2006.01)

(54)发明名称

转录因子FOXD1的新用途(57)摘要

本发明涉及转录因子FOXD1的新用途，具体涉及转录因子FOXD1在调控垂体瘤疾病中的作用。发明基于基因芯片方法对10例垂体瘤病例样本及5例正常对照样本进行测序，筛选出后备基因FOXD1。进一步做了QPCR验证和siRNA干扰实验，结果显示FOXD1与垂体瘤具有很好的相关性，干扰FOXD1基因表达减缓了垂体瘤细胞的增殖。本发明的结果为临床垂体瘤的诊断和新型治疗提供了新思路。

A61K 31/7088(2006.01)A61P 35/00(2006.01)

权利要求书1页 说明书8页序列表4页 附图3页

CN 105838820 ACN 105838820 A

权　利　要　求　书

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1.检测FOXD1基因或蛋白的制剂在制备垂体瘤诊断制剂中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，FOXD1基因或蛋白在垂体瘤组织中高表达。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，垂体瘤诊断制剂包括用荧光定量PCR方法、基因芯片方法检测FOXD1基因的表达。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，用于荧光定量PCR方法检测垂体瘤中FOXD1基因的产品含有一对特异性扩增FOXD1基因的引物；基因芯片包括与FOXD1基因的核酸序列杂交的探针，优选的，引物序列为SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2。

5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，垂体瘤诊断制剂包括用免疫方法检测垂体瘤中FOXD1蛋白的表达，优选的，用ELISA或胶体金方法检测FOXD1蛋白表达。

6.FOXD1基因或FOXD1蛋白的抑制剂在制备抗垂体瘤制剂中的应用。7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，抗垂体瘤制剂采用下述方法中的一种和/或几种抑制垂体瘤细胞中FOXD1基因的表达：通过激活FOXD1基因的抑制基因、激活抑制FOXD1基因表达的蛋白、导入抑制FOXD1基因表达的siRNA、激活促进FOXD1mRNA降解的microRNA、导入促进FOXD1蛋白降解的分子、抑制促进FOXD1基因表达的因子及蛋白的表达。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，抑制FOXD1基因表达的siRNA序列选自下列序列中的一种和/或几种：SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10，优选SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8。

9.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，抑制剂抑制垂体瘤细胞的增殖。10.一种抗垂体瘤制剂，其特征在于，抗垂体瘤制剂含有权利要求7中抑制FOXD1基因表达的siRNA序列。

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说　明　书转录因子FOXD1的新用途

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技术领域

[0001]本发明涉及生物医药领域，具体的涉及转录因子FOXD1的新用途，更具体的涉及转录因子FOXD1在调控垂体瘤疾病中的作用。

背景技术

[0002]真核生物转录水平的调控大多数是通过顺式调控元件和反式调控因子复杂的相互作用实现的。顺式调控元件是调控的场所，与顺式调控元件相互作用作为调控工具的就是反式调控因子，它们是能直接或间接识别顺式调控元件，参与调控转录的蛋白质。一般反式调控因子也称为转录因子(Transcription Factor，TF)。在广泛的意义下反式调控因子也包括RNA聚合酶等其他蛋白。转录因子是一类具有特定功能的蛋白质，它通过结合到DNA分子上的特定区域，将RNA聚合酶吸引到相应基因的启动子区域，从而开启转录。一个转录因子可以调控多个基因。研究发现，被同一个转录因子调控的基因显著的共表达，同时具有相似的生物功能。转录因子以及顺式调控模块，对于转录的开启起到了关键的作用，是基因表达调控中最重要的元件。研究发现转录因子可以调控细胞生长、凋亡的各个过程，此外，转录因子在细胞生长和癌症的发生转移过程中都起到了重要的调节作用。因此，研究它们可以帮助我们认识生物的复杂生理过程以及疾病的发生机理，具有重要的意义。[0003]垂体瘤是临床内分泌科和神经科的常见病，是颅内常见的良胜肿瘤，其发病率排在脑胶质瘤和脑膜瘤之后，居颅内肿瘤发病率的第三位。垂体瘤在组织学上属于良性肿瘤，但也有一些垂体瘤具有向周围组织浸润性生长的特点，称为侵袭性垂体瘤。侵袭性垂体瘤虽在病理上属于良性肿瘤，但具有向周围正常结构侵袭性生长的特点。单纯手术治疗难以全部切除，从而为肿瘤复发埋下隐患。目前，垂体瘤的发病机制和机理尚不清楚，因此需要进一步研究垂体瘤的发生和发展机制，尤其是相关的标志物，为临床诊断和新型治疗方案提供基础。

[0004]基于基因芯片方法对10例垂体瘤病例样本及5例正常对照进行测序，筛选出后备基因FOXD1。进一步做了QPCR验证和siRNA干扰实验，结果显示FOXD1与垂体瘤具有很好的相关性，干扰FOXD1基因表达减缓了垂体瘤细胞的增殖。本发明的结果为临床垂体瘤的诊断和新型治疗提供了新思路。

发明内容

[0005]本发明的目的在于提供检测FOXD1基因或蛋白的制剂在制备垂体瘤诊断制剂中的应用。

[0006]为实现上述目的，本发明通过基因芯片测序筛选到基因FOXD1，进而通过QPCR验证了FOXD1与垂体瘤具有很好的相关性，可用于制备垂体瘤辅助诊疗制剂，具有重要的临床应用价值。

[0007]进一步，垂体瘤诊断制剂包括用荧光定量PCR方法、基因芯片方法检测垂体瘤组织中FOXD1基因的表达。

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荧光定量PCR法是通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针，对PCR产物进行标记

跟踪，实时在线监控反应过程，结合相应的软件可以对产物进行分析，计算待测样品模板的初始浓度。荧光定量PCR的出现，极大地简化了定量检测的过程，而且真正实现了绝对定量。多种检测系统的出现，使实验的选择性更强。自动化操作提高了工作效率，反应快速、重复性好、灵敏度高、特异性强、结果清晰。

[0009]基因芯片又称为DNA微阵列(DNA microarray)，可分为三种主要类型：1)固定在聚合物基片(尼龙膜，硝酸纤维膜等)表面上的核酸探针或cDNA片段，通常用同位素标记的靶基因与其杂交，通过放射显影技术进行检测。2)用点样法固定在玻璃板上的DNA探针阵列，通过与荧光标记的靶基因杂交进行检测。3)在玻璃等硬质表面上直接合成的寡核苷酸探针阵列，与荧光标记的靶基因杂交进行检测。基因芯片作为一种先进的、大规模、高通量检测技术，应用于疾病的诊断，其优点有以下几个方面：一是高度的灵敏性和准确性；二是快速简便；三是可同时检测多种疾病。

[0010]用于荧光定量PCR方法检测垂体瘤中FOXD1基因的产品含有一对特异性扩增FOXD1基因的引物；基因芯片包括与FOXD1基因的核酸序列杂交的探针。[0011]进一步，垂体瘤诊断制剂包括用免疫方法检测垂体瘤中FOXD1蛋白的表达。优选的，免疫检测方法检测垂体瘤中FOXD1蛋白表达的为western blot或ELISA或胶体金检测方法。

[0012]酶联免疫吸附实验(ELISA)即将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行的技术。该技术可用于检测大分子抗原和特异性抗体等，具有快速、灵敏、简便、载体易于标准化等优点。ELISA检测试剂盒根据检测目的和操作步骤可分为间接法、双抗夹心法、竞争法、双位点一步法、捕获法测IgM抗体、应用亲和素和生物素的ELISA。ELISA检测试剂盒中生色底物可选择辣根过氧化物酶(HRP)或者碱性磷酸酶(AP)。

[0013]常用的免疫胶体金检测技术：(1)免疫胶体金光镜染色法细胞悬液涂片或组织切片，可用胶体金标记的抗体进行染色，也可在胶体金标记的基础上，以银显影液增强标记，使被还原的银原子沉积于已标记的金颗粒表面，可明显增强胶体金标记的敏感性。(2)免疫胶体金电镜染色法可用胶体金标记的抗体或抗抗体与负染病毒样本或组织超薄切片结合，然后进行负染。可用于病毒形态的观察和病毒检测。(3)斑点免疫金渗滤法应用微孔滤膜作载体，先将抗原或抗体点于膜上，封闭后加待检样本，洗涤后用胶体金标记的抗体检测相应的抗原或抗体。(4)胶体金免疫层析法将特异性的抗原或抗体以条带状固定在膜上，胶体金标记试剂(抗体或单克隆抗体)吸附在结合垫上，当待检样本加到试纸条一端的样本垫上后，通过毛细作用向前移动，溶解结合垫上的胶体金标记试剂后相互反应，当移动至固定的抗原或抗体的区域时，待检物与金标试剂的结合物又与之发生特异性结合而被截留，聚集在检测带上，可通过肉眼观察到显色结果。该法现已发展成为诊断试纸条，使用十分方便。[0014]进一步，检测FOXD1蛋白的ELISA法为使用ELISA检测试剂盒。试剂盒中的抗体可采用市售的FOXD1单克隆抗体。进一步，所述的试剂盒包括：包被FOXD1单克隆抗体的固相载体，酶标抗体，酶的底物，蛋白标准品，阴性对照品，稀释液，洗涤液，酶反应终止液等。[0015]进一步，检测FOXD1蛋白的胶体金法为使用检测试剂盒，抗体可采用市售的FOXD1单克隆抗体。进一步，胶体金检测试剂盒采用胶体金免疫层析技术或胶体金渗滤法。进一

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步，胶体金检测试剂盒硝酸纤维素膜上的检测区(T)喷点有抗FOXD1单克隆抗体、质控区(C)喷点有免疫球蛋白IgG。

[0016]本发明的目的在于提供一种检测垂体瘤的基因检测试剂盒，试剂盒检测基因FOXD1，采用特异的上游引物和下游引物，上游引物序列为SEQ ID NO.1，下游引物序列为SEQ ID NO.2。[0017]进一步，该PCR试剂盒适合于目前存在市场上的所有类型荧光定量基因扩增仪，灵敏度高，定量快速准确、稳定性好，具有良好的应用前景。[0018]进一步，上述荧光定量PCR试剂盒组分包括：特异性引物、内参引物、荧光定量PCR反应液。其中所述的特异性引物包括上游引物和下游引物，上游引物序列为SEQ ID NO.1，下游引物序列为SEQ ID NO.2。所述内参引物，上游引物序列为SEQ ID NO.3，下游引物序列为SEQ ID NO.4。

[0019]所述的试剂盒还包含RNA抽提试剂。

[0020]本发明目的是提供了一种垂体瘤蛋白检测试剂盒，检测试剂盒检测FOXD1蛋白。进一步的，试剂盒还包括其他检测试剂。

[0021]本发明目的是提供了一种检测垂体瘤的基因芯片，基因芯片包括与FOXD1基因的核酸序列杂交的探针。

[0022]本发明的目的在于提供FOXD1基因或蛋白抑制剂在制备抗垂体瘤制剂中的应用。[0023]进一步，抗垂体瘤制剂是指可以抑制垂体瘤细胞中FOXD1基因的表达的制剂。本领域人员熟知抑制基因的表达通常可以采用下述方法中的一种和/或几种：通过激活目的基因的抑制基因、激活目的基因的抑制基因表达的蛋白、采用RNA干扰技术抑制目的基因表达、激活促进目的基因mRNA降解的microRNA、导入促进目的基因编码蛋白降解的分子、抑制促进目的基因表达的因子及蛋白的表达。即通过激活FOXD1基因的抑制基因、激活抑制FOXD1基因表达的蛋白、导入抑制FOXD1基因表达的siRNA、激活促进FOXD1mRNA降解的microRNA、导入促进FOXD1蛋白降解的分子、抑制促进FOXD1基因表达的因子及蛋白的表达。[0024]RNA干扰(RNAi)是指外源性和内源性双链RNA在生物体内诱导同源靶基因的mRNA特异性降解，导致转录后基因沉默的现象，是一种使用小的双链RNA高效、特异地阻断体内某种特定基因的表达，促使mRNA降解，使细胞表现出特定基因缺失表型的技术。siRNA设计完成后可以采用直接合成法或者构建siRNA表达载体，制备好的siRNA可以通过磷酸钙共沉淀法、电穿孔法、DEAE-葡聚糖和polybrene法、显微注射或基因枪等机械法、阳离子脂质体试剂法等途径转染细胞。[0025]进一步，抑制FOXD1基因表达的siRNA序列选自下列序列中的一种和/或几种：SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10。[0026]优选siRNA序列为SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8。[0027]进一步，抗垂体瘤制剂抑制垂体瘤细胞的增殖。[0028]本发明的目的在于提供一种抗垂体瘤制剂，抗垂体瘤制剂抑制垂体瘤细胞中FOXD1基因的表达。[0029]进一步，抗垂体瘤制剂中含有抑制FOXD1基因表达的siRNA。优选的，抑制FOXD1基因表达的siRNA序列选自下列序列中的一种和/或几种：SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10。

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附图说明

[0030]图1是总RNA提取后电泳图M:DNAMarker(DM2000)，1-11对应11个样本。[0031]图2是FOXD1基因实时扩增曲线图。[0032]图3是FOXD1基因产物溶解曲线图。[0033]图4是siRNA干扰FOXD1基因表达图。

具体实施方式

[0034]下面结合具体实施例，进一步阐述本发明，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。本领域的普通技术人员可以理解：在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由权利要求及其等同物限定。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照厂商所建议的条件实施检测。

[0035]实施例1 FOXD1基因的差异表达[0036]1、收集样本[0037]垂体瘤患者：10例垂体瘤患者中男性5例，年龄为28-73岁，平均年龄为47岁；女性5例，年龄为25-68岁，平均年龄为44岁。纳入标准：患者行经鼻蝶垂体瘤手术切除，术前有颅脑MRI等影像学资料，术后病理切片证实为垂体瘤。经过医院伦理委员会同意，经患者签署知情同意书后取材。

[0038]正常垂体组织：取自大学解剖教研室，共5例，排除内分泌相关疾患。取材方法同垂体瘤患者。

[0039]手术取所需组织，生理盐水洗净后，立即放入经焦碳酸二乙醋(DEPC)水处过的冻存管中，置入液氮备用。[0040]2、RNA提取以及质量分析

[0041]使用Trizol一步法提取垂体瘤组织和正常垂体组织的总RNA，通过Nanodrop ND-1000读取260nm和280nm处的吸光度值(A)测定RNA溶液的纯度。经1％甲醛变性琼脂糖凝胶电泳，紫外透射光下观察，检测RNA的完整性。[0042]3、基因芯片杂交及扫描[0043]总RNA经线性化扩增后，cy3-UTP标记，荧光标记后的cRNAs采用RNEASY Mini Kit纯化，用Amhion的RNAFragmentation Reagents对标记好的cRNAs进行片段化处理。采用美国Agilent公司的人全基因表达谱芯片(4×44K基因)，在芯片杂交炉中65℃杂交17h，然后洗脱、染色，最后用Agilent DNA MicroarrayScanner扫描仪扫描。[0044]4、芯片数据处理与分析

[0045]杂交后的芯片经芯片扫描仪读取数据点后，将数据导入分析软件，对于两组比值的自然对数绝对值大于2.0或小于0.5的基因作为差异表达基因。[0046]5、统计学处理

[0047]采用SPSS 13.0统计软件进行数据分析，组间差异比较采用单因素方差分析法，P<0.05差异有显著性意义。[0048]6、结果

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与正常垂体组织相比，垂体瘤组织中FOXD1基因的mRNA水平显著增加，logFC值为

2.64，差异具有统计学意义(P<0.05)。

[0050]实施例2 qPCR实验验证FOXD1基因的差异表达[0051]1、收集样本

[0052]按照实施例1的标准收集垂体瘤患者40例，取其垂体瘤组织。收集正常垂体组织30例。

[0053]2、RNA提取以及质量分析[0054]采用Reagent(invitrogen，货号15596-018)进行样本RNA提取。[0055]具体操作如下：

[0056]收集样本后冻存于液氮，取出后把组织放入已预冷的研钵中进行研磨,待组织样本成粉末状后：

[0057]①加入Trizol，室温保存5分钟；[0058]②加氯仿0.2ml，用力振荡离心管，充分混匀，室温下放置5-10分钟；

[0059]③12000rpm高速离心15分钟后吸取上层水相(吸70％)到另一新离心管管中,注意不要吸到两层水相之间的蛋白物质。移入新管,加入等体积的-20℃预冷异丙醇,充分颠倒混匀，置于冰上10分钟；

[0060]④12000rpm高速离15分钟后小心弃掉上清液，按1ml/ml Trizol的比例加入75％DEPC乙醇洗漆沉淀(4℃保存)，洗漆沉淀物，振荡混合，4℃下12000rpm高速离心5分钟；[0061]⑤弃去乙醇液体，室温下放置5分钟以充分晾干沉淀,加入DEPC处理过的水溶解沉淀；

[0062]⑥用Nanodrop2000紫外分光光度计测量RNA纯度及浓度,冻存于-70℃。RNA质量判定标准：RNA样本的OD260/OD280值为1.7-2.2之间；总RNA电泳图谱有清晰的28S、18S条带；70℃水浴保温1小时后的电泳图谱与水浴保温前的图谱无明显差异。[0063]3、逆转录合成cDNA[0064]采用III Reverse Transcriptase(invitrogen，货号18080-044)进行cDNA反转录，实验操作按产品说明书进行，具体操作如下：[0065]使用逆转录试剂盒,用逆转录缓冲液对lμg总RNA进行逆反录合成cDNA。采用25μl反应体系，每个样品取1μg总RNA作为模板RNA,在PCR管中分别加入以下组分：[0066]5×逆转录缓冲液5μl，10mmol/l dNTP 1.25μl，0.1mmol/l DTT 2.5μl，30μmmol/l Oligo dT 2μl,200U/μl MMLV 1.25μl，模板RNA 1μg，加入灭菌水至总体系25μl。42℃孵育1小时,72℃10分钟,短暂离心。cDNA保存放-20℃冰箱备用。[0067]4、Real-Time PCR[0068]仪器及分析方法

[0069]用ABI 7500型荧光定量PCR仪，采用2-△△CT法进行数据的相对定量分析。[0070]操作过程如下：[0071]反应体系：[0072]用PowerGreen PCR Master Mix(invitrogen，货号4367659)进行扩增，实验操作按产品说明书进行。扩增程序为：95°10min，(95℃15sec，60℃60sec)×45个循环。RealTime反应体系为：

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2×mix：10μl

[0074]上游引物(10uM)：0.5μl[0075]下游引物(10uM)：0.5μl[0076]模板：2μl

[0077]加入灭菌蒸馏水至25μl。[0078]引物筛选

[0079]将各样本cDNA混合后，以此为模板进行5倍梯度稀释，稀释后样品各取2μl作模板，分别用目的基因引物和内参基因引物进行扩增，同时在60-95℃进行融解曲线分析，根据扩增效率高和溶解曲线单峰原则进行引物筛选。

[0080]

样品Real-Time PCR检测

[0082]将各样品cDNA 10倍稀释后取2μl作模板，分别用目的基因引物和内参基因引物进行扩增。同时在60-95℃进行溶解曲线分析。[0083]5、实验结果[0084]取5μlRNA，用1％琼脂糖凝胶进行电泳，结果如图1所示。各样本实时扩增曲线图和样本扩增产物溶解曲线图见图2和图3，扩增曲线拐点清楚、整体平行性好，表明各反应管的扩增效率相近，极限平而无上扬现在，曲线指数期斜率较大，说明扩增效率较高；样本扩增产物溶解曲线都是单峰，说明扩增产物只有一条，为特异性扩增；与正常垂体组织相比，垂体瘤组织中FOXD1基因的mRNA水平显著增加，根据qRT-PCR的相对定量公式：2-△△ct，相对表达量约为3.97，差异具有统计学意义(P<0.05)，验证结果同基因芯片结果。[0085]实施例3抑制FOXD1基因表达[0086]1、siRNA设计合成

[0087]

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以上siRNA序列与阴性对照siRNA序列(NC-siRNA)均由上海吉玛制药技术有限公

司提供：[0090]2、垂体瘤细胞的培养与转染[0091]2.1细胞培养

[0092]取垂体瘤组织块浸入RPMI-1640培养基，DPBS清洗3次后剪碎，室温下0.25％胰蛋白酶消化1h，加入等体积含10％FCS的RPMI-1640培养基终止消化，添加终浓度为0.87％NH4Cl于37℃作用5mim；70目细胞筛网过滤除去组织碎片后，1000r/min离心5min，用含10％FCS，2mM谷氨酞胺、100U/mL青霉素和100pg/mL链霉素的RPMI-1640培养基重悬细胞沉淀，在5％二氧化碳，37℃及饱和湿度的二氧化碳细胞培养箱培养。3d换液1次，直到细胞形成单层，用0.25％胰蛋白酶消化，重新接种，传代培养。[0093]2.2细胞转染

[0094]将2×105个垂体瘤细胞接种到25cm2细胞培养板中，在37℃、5％CO2培养箱培养，当细胞汇合度达到70％时进行细胞转染。转染按照脂质体转染试剂2000(购自于Invitrogen公司)的说明书转染，实验分为阴性对照组和实验组，浓度为20nM/孔，同时分别转染。[0095]3、利用QPCR实验检测siRNA的干扰效率。[0096]3.1提取细胞总RNA利用常规方法进行操作。[0097]3.2逆转录[0098]同实施例2。[0099]3.3QPCR

[0100]同实施例2。[0101]3.4统计学方法[0102]同实施例2。[0103]4、结果

[0104]结果如图4所示，与对照组相比三各实验组均在不同程度上抑制了目的基因的表达，差异具有统计学意义(P<0.05)，其中，FOXD1-siRNA2抑制FOXD1基因的表达效果最佳，抑制率达73％，FOXD1-siRNA1、FOXD1-siRNA3的抑制率分别为54％和48％，故而，选取FOXD1-siRNA2进行后续的实验。

[0105]实施例4 FOXD1基因的表达对垂体瘤细胞增殖能力的测定

[0106]使用Cell Counting kit-8(cck-8)试剂盒用于检测垂体瘤细胞增殖[0107]1、步骤

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按照前面实施例3的方法进行垂体瘤细胞的培养和转染，细胞分为二个实验组：组

1：转染NC-siRNA细胞组；组2：转染FOXD1-siRNA2细胞组。[0109]转染24h后，以2.5×105/ml密度接种于96孔细胞培养板中，每个实验组设计三复孔，每孔加入10μl的CCK-8溶液，37℃，5％CO2培养箱中孵育4h；然后按照试剂盒说明，选择450nm波长，在酶标仪上测定各孔吸光度值(OD值)。[0110]2、统计学方法

[0111]实验都是按照重复3次来完成的，结果数据都是以平均值±标准差的方式来表示，采用SPSS13.0统计软件来进行统计分析的，两者之间的差异采用t检验，认为当P<0.05时具有统计学意义。[0112]3、结果

[0113]与对照组相比，转染FOXD1-siRNA2细胞组细胞增殖缓慢，差异具有统计学意义(P<0.05)。上述实验结果表明，FOXD1基因表达促进了垂体瘤细胞的增殖。[0114]本发明采用高通量测序筛选出垂体瘤致病相关基因FOXD1，结合分子细胞生物学实验验证，证实了FOXD1是垂体瘤密切的标志物。本发明为垂体瘤临床诊疗提供了新的靶标，具有很好的临床应用前景。

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图4

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