如何测量RNA的纯度和含量

问题：

假如你有一份RNA样品，体积为10µL，需要测其样品的浓度和纯度，应该如何做？请写出测定的原理和方法。

【原理】

使用光密度测定法测量其浓度，RNA在260nm处有一很高的吸收峰，利用这个原理我们测其OD

260，再推算出其浓度。使用DNA/RNA浓度测定仪，测定样品A260和A280值。根据A260/ A280比值，估测RNA质量。一般A260/ A280比值在

1.8-

2.0之间，可以满足实验要求。

在100µl RNA原液中取1μl稀释至250μl（DEPC处理的水），测定样品的A260和A280的值，按下列公式计算其浓度：

RNA原液浓度=A260×稀释倍数×40（n g/μl）

【仪器】

分光光度计(紫外可见光两用)。

【试剂】

水、RNA溶液

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【方法步骤】

测定 RNA浓度按以下步骤进行操作： ⑴在10μl的RNA原液取1μl ，放在

0.5mlEP管中，加入249μl dd H2O，用移液枪反复混匀。 ⑵用dd H2O为空白对照，调节A260零点。

⑶倒掉比色杯中的水，加入稀释并混合均匀的RNA样液，测定A260值。倒掉比色杯中的RNA样液，用dd H2O冲洗比色杯，再调节A280零点。⑷倒掉比色杯中的水，加入稀释并混合均匀的RNA样液，测定A280值。计算A260/ A280比值，比值≥

1.8，满足实验要求。

⑸ RNA原液浓度=A260×稀释倍数×40（n g/μl） 测定 RNA纯度按以下步骤进行操作： (1)取4ulRNA样品加水到1ml。 (2)用1ml水做空白。

(3)把样品杯放在分光光度计比色槽上。

(4)每µl中RNA浓度(ug)将是OD值的10倍，例如稀释后样品在260nm处OD值为 0.2，则原RNA样品浓度为2ug／µl。

(5)再测一次280nm处OD值，计算二者的比率，若比率接近2，则说明样品中核酸比较纯。若比率小于

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1.6，则说明蛋白或其它吸收此波长的杂质在其中，再用酚／氯仿抽提继以乙醇沉淀以除去杂质。 (6)如果想检测样品中是否残存酚等有机杂质，那么还要测定一次230nm处OD值。

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