放线菌酵母菌霉菌的形态观察和微生物的显微记数法

微生物的显微计数法；放线菌、酵母菌、霉菌的形态观察

微生物的显微计数法

一、实验目的

了解血球计数板的构造和使用方法；

掌握使用血球计数板进行微生物计数的方法。

二、实验原理

血球计数板上有由四条平行槽构成的三个平台，中间的平台较宽，其中间又被一短槽隔成两半，每边平台上面各刻有一个方格网，即为此计数板的计数室。计数室的长宽各为1 mm，中间平台下陷0.1mm，故盖上盖玻片后计数室的容积为0.1mm3。

用血球计数板计数微生物细胞的数量，就是先测定若干个方格中的微生物细胞的数量。再换算成每ml菌液中微生物细胞数量。

三、实验仪器、材料和用具

实验用具：载玻片、盖片、滴管、擦镜纸、 洗瓶； 实验仪器：生物显微镜、血球计数板、手动计数器； 菌种：啤酒酵母。

四、实验步骤

1.稀释

将啤酒酵母菌悬液进行适当稀释，菌液如不浓，可不必稀释； 2.镜检计数室：

在加样前，先对计数板的计数室进行镜检，若有污物则需清洗； 3.加样品

在清洁干燥的血球计数板上盖上盖玻片。用细口滴管吸取振荡均匀的啤酒酵母菌稀释液，对准盖玻片边缘，轻挤滴头，让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自行进入计数室，让计数室刚好充满菌液。

注意不可有气泡 ，每次吸液前都要振荡均匀！ 4.显微镜计数

将血球计数板置于显微镜载物台上，先用低倍镜找到计数室所在位置，然后换成高倍镜(X40)观察。静置1分钟后进行计数。

在计数前若发现菌液太浓或太稀，需重新调节稀释度后再计数 5.显微镜计数方法

样品稀释度要求每中格内有l0～20个菌体为宜。

（1）16X25型计数板：取左上，右上，左下，右下四个中格(共4个中格，l00个小格)内的细胞逐一进行计数。

（2）25X16型计数板：除取左上，右上，左下，右下四个中格外，还需加数中央的一个中格(共5个大格，80个小格)内的细胞。

计数时，遇到中格线上的酵母菌时，一般只计此中格的上方及右方线上的细胞，而且只计胞体一半以上在线内的细胞。如遇酵母出芽，芽体大小达到母细胞的一半时，即作两个菌体计数。

将各中格的细胞数填入表中，如各中格的细胞数相差不大，表明菌悬液较均匀，数据可以使用。

重复1-2次实验过程，取平均值，按下列公式计算每ml菌液中的酵母菌细胞数。

16X 25型血球计数板的计算公式： 100小格内酵母细胞数4酵母细胞数/ml40010稀释倍数 10025X16型血球计数板的计算公式：

80小格内酵母细胞数4酵母细胞数/ml40010稀释倍数

806.清洗血球计数板

计数完毕后，马上将血球计数板用洗瓶冲洗，亦可用棉花擦洗，切勿用硬试管刷洗刷。洗完后用蒸馏水冲洗一遍，斜置晾干或用滤纸沾干，最后用擦镜纸揩干净。

放线菌、酵母菌、霉菌的形态观察

一、实验目的

观察青霉、曲霉、根霉。注意菌丝(形状、有无隔膜)、菌丝变态(假根、匍匐菌丝、孢子穗、孢子囊、接合孢子囊)。 （1）青霉的分生孢子梗、小梗和分生孢子；

（2）曲霉的分生孢子梗、顶囊、小梗和分生孢子；

（3）黑根霉的假根、匍匐枝、孢子囊柄、孢子囊、孢子囊孢子和结合孢子。

放线菌的特征结构观察（观察链霉菌装片）：注意观察基内菌丝、气生菌丝的分布，孢子丝，分生孢子。

二、实验原理

放线菌一般由分枝状菌丝组成，它的菌丝可分为基内菌丝(营养菌丝)、气生菌丝或有孢子丝三种。放线菌生长到一定阶段，大部分气生菌丝分化成孢子丝，通过横割分列的方式产生成串的分生孢子。孢子丝形态多样，有直、波曲、钩状、螺旋状、轮生等多种形态。孢子也有球形、椭圆形、杆状和瓜子状等等。它们的形态构造都是放线菌分类鉴定的重要依据。

酵母菌是单细胞的真核微生物，细胞核和细胞质有明且分化，个体比细菌大得多。酵母菌的形态通常有球状、卵园状、椭圆状、柱状或香肠状等多种。酵母菌的无性繁殖有芽殖、裂殖和产生掷孢子；酵母菌的有性繁殖形成子囊和子囊孢子。酵母菌母细胞在一系列的芽殖后，如果长大的子细胞与母细胞并不分离，就会形成藕节状的假菌丝。

霉菌形态比细菌、酵母菌复杂，个体比较大，具有分枝的菌丝体和分化的繁殖器官。霉菌营养体的基本形态单位是菌丝，包括有隔菌丝和无隔菌丝。营养菌丝分布在营养基质的内部，气生菌丝伸展到空气中。营养菌丝体除基本结构以外，有的霉菌还有一些特化形态，例如假根、匍匐菌丝、吸器等。霉菌的繁殖体不仅

包括无性繁殖体，例如分生孢子，孢子囊等，包裹其内或附着其上的有各类无性孢子；还包括有性繁殖结构，例如子囊果，其内形成有性孢子。 三、实验仪器、材料和用具

生物显微镜；青霉、曲霉、放线菌、黑根霉装片

四、实验步骤

分别在显微镜下观察青霉、曲霉、放线菌、黑根霉装片，并绘制出观察到的霉菌、放线菌形态，包括菌丝、孢子的状态等。

理论上应观察到的霉菌、放线菌形态：

青霉：

曲霉：

根霉：

放线菌：

五、实验结果与讨论

显微镜计数：

所用的计数板为25X16型计数板，左上、左下、右下、右上、中间的菌体数分别为：14、20、18、16、13。

根据计算公式：

酵母细胞数/ml=（14+20+18+16+13）/80*400*104=4*106 结果分析：

计数板上菌体数目较少，分布的并不是很均匀，可能是因为滴加稀释液前没有将试管充分振荡均匀，使得菌体分布不均，造成偏差。