分析高效液相色谱法及在药品检验中的应用

２０１５年第１期　分析高效液相色谱法及在药品检验中的应用　刘　立谢浩　（江苏吉贝尔药业股份有限公司　江苏镇江２１２０００）　【摘耍】　目的：探究分析高效液相色谱法及在药品检验中的应用，并总结检验经验。方法：本研究选择银杏叶提取物中银杏黄酮类药物为研究对象，平均分为对照组和实验　组，样品量均称取Ｏ．２ｇ，其中对照组采用薄层色谱（ＴＬＣ）法进行检测，实验组组采用高效液相色谱法（ＨＰＬＣ）进行检测，之后，比较两组不同检测方法下的分离率、纯度、精密度和产　品回收率。结果：实验组采用高效液相色谱法（ＨＰＬＣ）进行检测后，银杏黄酮水解分离三种主要黄酮贰元，分别为黄酮贰元槲皮素、山萘素和异鼠李素纯组分分离率分别为９８．　７９％、９８．７７、９８．８９（Ｐ＜０．０５），纯度分别为９９．８９％，９９．９９％、９９．９７％（Ｐ＜０．０５）；实验组山萘素加样后的产品回收率为９９％，明显高于对照组（Ｐ＜Ｏ．０５）；以上差异均具有统计　学意义。结论：采用高效液相色谱法进行药品检验，具有方法简便、优化、精密度高的优点，能够获得比较好的分离效果和产品回收率，测定结果可靠且快速可行，值得推广应用。　【关键词】　高效液相色谱法；薄层色谱；银杏黄酮；临床应用　【中图分类号】Ｒ５６２．２１　【文献标识码】Ｂ　【文章编号】１００５—００１９（２０１５）０１—０５９８—０ｌ　表１　比较两组不同检测方法下的分离率、纯度、精密度　本研究选择银杏耶提取物中银杏黄酮类药物为研究对象，平均分为对照组和实验　组，样品量均称取０．２ｇ，探究分析高效液相色谱法及在药品检验中的应用，并总结检验　经验。现报告如下。　１．主要试剂与仪器　１．１主要试剂和药品　银杏叶提取物（ＥＧｂ德国威玛舒培博士药厂，注册证号１４２００９０２９６）　重蒸水（超纯水仪滤膜过滤）　甲醇（分析纯ＡＲ，深圳市华昌化工有限公司）　磷酸（分析纯，深圳市华昌化工有限公司）　黄酮贰元槲皮素对照品（上海亚培生物科技有限公司）　１．２仪器　美国光谱物理公司高效液相色谱仪ｓＰ８８ｏｏ泵，５４４００型积分仪，ＣｈｒｏｍＤｅ脱气机，　Ｓｐｈｅｒｉ一５ＲＰ一１８（５ｕｒｎ）色谱柱（２２ｏｍｍｘ４．６ｒａｍ），进样器配１０ｕＬ定量管。ＷａｔｅｒｓＭ４９０　可编程序紫外检测器。　２．实验方法　４．１比较两组不同检测方法下的山萘素的回收率　比较两组不同检测方法下的山萘素的回收率，结果如表２所示。实验组山萘素加　样后的产品回收率为９９％，明显高于对照组（Ｐ＜０．０５）；以上差异均具有统计学意义。　表２比较两组不同检测方法下比较两组不同检测方法下的山萘素的回收率　本研究选择银杏叶提取物中银杏黄酮类药物为研究对象，平均分为对照组和实验　组，样品量均称取０．２ｇ，其中对照组采用薄层色谱（ＴＬＣ）法进行检测，实验组组采用高　效液相色谱法（ＨＰＬＣ）进行检测，之后，比较两组不同检测方法下的分离率、纯度、精密　度和山萘素产品回收率。　２．１样品制备　称取０．２ｇ银杏叶提取物，加入４０ＩＩｌｌ甲醇，震荡摇匀，使其完全溶解，然后加入１．　５ｍｏｌ／Ｌ的盐酸溶液４ＯｒａＬ，混匀，置水浴锅中３７。Ｃ加热１２０分钟，待冷却后，置于５０ｍｌ　容量瓶中，利用甲醇进行定容。室温下放置备用。　２．２高效液相色谱法（ＨＰＬＣ）条件　流动相：甲醇一０．４％磷酸溶液（５５：４５）　流速：１．ｏｍＬ／ｍｉｎｉ　柱温：２５℃　进样体积：１０ｕＬ　检测波长：３６０ｒｉｍ　３统计学方法　５．讨论　色谱法最初仅仅是作为一种分离手段，是根据混合物中不同组分在流动相和固定　相中具有不同的分配系数，当两相作相对运动时，这些组分在两相间进行反复多次的分　配从而得到分，高效液相色谱法（ＨＰＬＣ）是近年来逐渐应用到药品、食品等物质的监测　工作当中，本实验通过采用高效液相色谱法（ＨＰＬＣ）分析银杏叶提取物中银杏黄酮类药　物，研究发现，采用高效液相色谱法（ＨＰＬＣ）分析后，银杏黄酮水解分离三种主要黄酮贰　元，分别为黄酮贰元槲皮素、山萘素和异鼠李素纯组分、分离率分别为９８．７９％、９８．７７、　９８．８９（Ｐ＜０．０５），纯度分别为９９．８９％、９９．９９％、９９．９７％，分离率和纯度值都相对于薄　层色谱均较高，另外通过外部加样山萘素，检测得知产品回收率为９９％。可见，临床上　采用尿常规检验联合Ｃ一反应蛋白诊断小儿急性阑尾炎，能够有效提高诊断的准确率，　降低误诊概率，具有一定的诊断价值，对于急性阑尾炎确诊以及及时治疗具有熏要的意　义。值得临床推广应用。　参考文献　本研究中，所有的检测统计学数据采均用ＳＰＳＳ１８．０软件进行处理，结果采用均数　±标准差（Ｘ±ｓ）进行表示，数据均经由ＳＰＳＳ１８．０软件进行ｔ检验。Ｐ（Ｏ．０５表示数　据具有差异性以及具有统计学意义。Ｐ＜Ｏ．０ｌ表示数据具有显著性差异以及具有统计　学意义。　４．结果　４．１比较两组不同检测方法下的分离率、纯度、精密度　比较两组不同检测方法下的分离率、纯度、精密度。结果如表１所示。实验组采用　高效液相色谱法（ＨＰＬＣ）进行检测后，银杏黄酮水解分离三种主要黄酮贰元，分别为黄　酮贰元槲皮素、山萘素和异鼠李素纯组分、分离率分别为９８．７９％、９８．７７、９８．８９（Ｐ＜０．　０５），纯度分别为９９．８９％、９９．９９％、９９．９７％（Ｐ（Ｏ．０５）；以上差异均具有统计学意义。　［１］　金蕊，王宝庆，金哲雄．高效液相色谱一质谱联用技术在中药鉴定中的应用［Ｊ］．　生命科学仪器．２００９（０５）　［２］　刘艳芳，刘艳明，董军，李伟，王超然，张秀莉，梁鑫淼．中药物质基础的高效液相　色谱分离分析方法研究［Ｊ］．中国科学（Ｂ辑：化学）．２００９（０８）　［３］　付秀娟，王卓伟，谭生健．高效液相色谱法测定丹芩滴丸中黄芩苷和隐丹参酮含　量［Ｊ］．中国医院药学杂志．２００５（Ｏ７）　［４］　赵云丽，袁永越，于治国，吴红霞，商晓霞，刘涛．高效液相梯度洗脱法测定氨苄西　林丙磺舒分散片中的有关物质［Ｊ］．中国医院药学杂志．２００５（０５）　直肠肛门瘘患者手术前后直肠肛门反射的变化研究　熊寿应　（石门县人民医院湖南　常德４１５３００）　【摘要】　日的分析直肠肛门瘘患者手术前后直肠肛门反射的变化。方法研究对象选取本院肛肠科２０１２年９月至２０ｌ４年８月收治的８０例直肠肛门瘘患者，根据肛瘘类型分　组，其中高位肛瘘患者纳入Ａ蛆，低位肛瘘患者纳入Ｂ组，对比分析两组患者手术前后直肠静息压（ＲＲＰ）、肛管最大收缩压（ＡＭＣＰ）、肛管最长收缩时间（ＡＬＣＴ）、肛管静息压（ＡＲＰ）　等直肠肛门反射功能指标的变化。结果手术治疗后患者ＲＲＰ、ＡＭＣＰ、ＡＲＰ等指标有所下降，其中Ａ组各指标变化幅度明显大于Ｂ组，经ｔ检验分析发现组问差异有统计学意义（Ｐ　＜０　０５）。两组患者治疗前后ＡＬＣＴ无明显差异（Ｐ＞Ｏ．０５）。结论直肠肛门瘘手术后可引起肛管内外括约肌发生不同程度的损伤，直肠肛门反射下降，尤其对高位肛瘘患者影响程　度更大，在今后的Ｉ临床工作中应予以重视。　【关键词】　直肠肛门瘘；手术治疗；直肠肛门反射；变化　【中图分类号】Ｒ６５７．１　【文献标识码】Ｂ　直肠肛门瘘是肛肠科临床常见疾病之一，多发生于青壮年男性。按照发生位置的　不同肛瘘可分为高位肛瘘和低位肛瘘。手术是临床治疗肛瘘的首选治疗方案，但术后　对直肠肛门反射可造成一定的的影响…。本文分析了直肠肛门瘘患者手术前后直肠肛　门反射的变化，现将研究结果分析报告如下。　１．资料和方法　１．１一般资料　研究对象选取本院肛肠科２０１２年９月至２０１４年８月收治的８０侧直肠肛门瘘患　者，均有排便困难、疼痛、流脓等临床表现。根据肛瘘类型分组，其中瘘管位于外括约肌　深部以上的高位肛瘘患者纳入Ａ组，共计３５例，其中男性２６例，女性９例；年龄３Ｏ岁一　６ｏ岁，平均年龄（４６．５３　４－１１．２４）岁；体重５１ｋｓ一８０ｋｇ，平均体重（６２．５７　４－１０．６５）ｋｇ；病　程３个月一５年，平均病程（１．８５±０．５６）年。　将瘘管位于外括约肌深部以下的低位肛瘘患者纳人Ｂ组，共计４５例，其中男性３２　例，女性ｌ３例；年龄２８岁一６ｌ岁，平均年龄（４５．９５±１１．３３）岁；体重５Ｏｋｇ一８２ｋｇ，平均　体重（６２．８４　４－１０．４２）ｋｇ；病程６个月一６年，平均病程（１．９２±Ｏ．６１）年。　对两组患者性别、年龄、体重、病程等一般资料进行统计学分析，发现组间差异无统　计学ｊ薛义（Ｐ＞０．０５），具有良好的可比性。　１．２治疗方法　所有患者均自愿接受手术治疗。Ａ组高位肛瘘患者采用低位切开高位挂线法治　疗，麻醉后充分扩肛，结合肛门指检、探针检查、肛窥镜检查、美蓝试验、挤压试验等确定　主瘘管的走向、内口位置、瘘管与肛门括约肌关系等。切开直肠环以下所有瘘，清除坏　死组织，修整切１２１皮缘成倒Ｖ形创面。采用刮匙搔刮、清除坏死组织。内口在肛管直肠　环中下２／３以上者将探针插入高位瘘管。沿瘘管走向切开肛门皮肤直至外括约肌，切开　【文章编号】１００５—００１９（２０１５）０１—０５９８—０１　内口和外口之间肛管黏膜，游离肛管直肠环，切开内口表面黏膜，将橡皮筋自内口引出　后拉紧结扎。术后１周紧线，依靠橡皮筋异物刺激慢性切断肛管直肠环内口残余的瘘　管，橡皮筋在２～３周内脱落。切开的管道腔创口底小口大，呈喇叭状，以保证引流　通畅［２ｌ。　Ｂ组低位肛瘘患者采用肛瘘瘘管切除术治疗，麻醉后常规消毒、铺巾。持探针自外　口探人，引导探针自肛管内口引出。沿探针切开瘘管壁，切除感染的瘘管组织，底层深　部的管壁坏死组织搔刮干净，并切除内口处肛窦、肛腺、肛门腺导管组织，修剪创缘。创　口内填塞油纱条，椎型纱布加压包扎【　。　术后所有患者均控制大便１—２ｄ，以免引起刨口疼痛、出血。每Ｅｔ采用金玄痔科熏　洗散溶液熏洗及坐浴，定期换药［４］。　１．３评价指标　分别于手术前后采用智能双导肛肠压力检测仪测量直肠肛门反射功能。患者取左　侧卧位，检测前排空大便，放松肛门，将经过石蜡油润滑的囊球插入直肠，进行ＲＲＰ、ＡＭ．　ＣＰ、ＡＬＣＴ、ＡＲＰ等直肠肛门反射功能指标的检测＿５＿５。　１．４数据处理　相关数据均录入ＳＰＳＳ１７．０软件进行数据处理，统计学分析时计量资料以均数±标　准差（Ｘ±ｓ）表示，比较采用ｔ检验。Ｐ＜０．０５代表差异结果有统计学意义。　２．结果　手术治疗后患者ＲＲＰ、ＡＭＣＰ、ＡＲＰ等指标有所下降，其中Ａ组各指标变化幅度明　显大于Ｂ组，经ｔ检验分析发现组间差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。两组患者治疗前后　ＡＬＣＴ无明显差异（Ｐ＞０．０５）。具体数据如表１所示。　作者简介：刘立，１９８９年一，汉，男，药师，毕业于苏州大学医学部，工作单位：江苏吉贝尔药业股份有限公司谢浩，１９８６一，汉，男，助理工程师，毕业于重庆工学院，工作　单位：江苏吉贝尔药业股份有限公司　５９８　医学美学美容