培养基母液的配制方法

培养基母液的配制方法

一、实验目的 1.了解无菌操作

2.掌握培养基母液的配制方法 二、实验原理

配制培养及时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配制，即将所选培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量，分别先配制成一系列的母液置于冰箱中保存，使用时按比例吸取母液进行稀释配制即可。 三、实验器材和药品

器材：电子天平、烧杯、容量瓶、细口瓶、药勺、玻璃棒、电炉。药品：NH4NO3、KNO3、CaCl2·2H2O、 MgSO4·7H2O、KH2PO4、KI、H3BO3、MnSO4·4H2O、 ZnSO4·7H2O、Na2MoO4·2H2O、 CuSO4·5H2O、CoCl2·6H2O、FeSO4·7H2O、 Na2-EDTA·2H2O、肌醇、烟酸、盐酸吡哆醇(维生素B6)、盐酸硫胺素 (维生素B1)、甘氨酸。 四、实验步骤

1、大量元素母液的配制

各成分按照表1培养基浓度含量扩大10倍用天平称取，用蒸馏水分别溶解，按顺序逐步混合。后用蒸馏水定容到 1000ml的容量瓶中，即为10倍的大量元素母液。到入细口瓶，贴好标签保存于冰箱中。配制培养基时，每配1L培养基取此液100ml。

表1 MS培养基大量元素母液制备

培养基浓度序号 1 2 3 4 5 注意：

(1) 配制大量元素母液时，某些无机成分如Ca2+、SO42－、Mg 2+和H2PO4一等在一起可能发生化学反应，产生沉淀物。为避免此现象发生，母液配制时要用纯度高的重蒸馏水溶解，药品采用等级较高的分析纯，各种化学药品必须先以少量重蒸馏水使其充分溶解后才能混合，混合时应注意先后顺序。特别应将Ca2+、SO42一、Mg 2十和H2PO4一等离子错开混合，速度宜慢，边搅拌边混合。

药品名称 （mg/L） NH4NO3 KNO3 1650 1900 (mg) 16500 19000 4400 3700 1700 扩大10称量CaCl2·2H2O 440 MgSO4·7H2O 370 KH2PO4 170

(2)CaCl2·2H2O要在最后单独加入，在溶解CaCl2·2H2O 时，蒸馏水需加热沸腾，除去水中的CO2，以防沉淀。另外，CaCl2·2H2O放入沸水中易沸腾，操作时要防止其溢出。 2、微量元素母液的配制

MS培养基的微量元素无机盐由7种化合物（除Fe ）组成。微量元素用量较少，特别是 CuSO4·5H2O、 CoCl2·6H2O ，因此在配制中分微量Ⅰ、Ⅱ配制。按照表2，表3配方，用电光天平称量，其它同大量元素。配制培养基时，每配制1L培养基，取微量Ⅰ10ml，微量Ⅱ0.1ml。

表2 MS培养基微量Ⅰ的配制

序号 化合物名称 培养基浓度（mg/L） 1 2 3 4 5 MnSO4·4H2O 22.3 ZnSO4·7H2O 8.6 H3BO3 KI 6.2 0.83 扩大100倍称量(mg) 2230 860 620 83 25 Na2MoO4·2H2O 0.25 表3 MS培养基微量Ⅱ的配制

序号

化合物名称 培养基浓度扩大10000倍称量

（mg/L） 1 2 注意：

CuSO4·5H2O 0.025 CoCl2·6H2O 0.025 (mg) 250 250 使用电子分析天平时注意不要把药品撒到称盘上，用完以后，用吸耳球将天平内的脏物清理干净。 3、铁盐母液的配制

铁盐不是都需要单独配成母液，如柠檬酸铁，只需和大量元素一起配成母液即可。目前常用的铁盐是硫酸亚铁和乙二胺四乙酸二钠的螯合物，必须单独配成母液。这种螯合物使用起来方便，又比较稳定，不易发生沉淀。配制方法同上，直接用蒸馏水加热搅拌溶解，定容至1L。配制培养基时，配制1L取此液10ml。

表4 MS铁盐母液的配制

序号 化合物名称 培养基浓度（mg/L） 1 2 注意：

Na2-EDTA 37.3 扩大100倍称量(mg) 3730 2780 FeSO4·7H2O 27.8

在配制铁盐时，如果加热搅拌时间过短，会造成FeS04和Na2-EDTA 鳌合不彻底，此时若将其冷藏，FeSO4会结晶析出。为避免此现象发生，配制铁盐母液时，FeSO4和Na2-EDTA 应分别加热溶解后混合，并置于加热搅拌器上不断搅拌至溶液呈金黄色(约加热20 - 30 min)，调pH值至5 .5，室温放置冷却后，再冷藏。 4、有机母液的配制

MS培养基的有机成分有甘氨酸、肌醇、烟酸、盐酸硫胺素和盐酸吡哆素。培养基中的有机成分原则上应分别单独配制。配制直接用蒸馏水溶解，定容至1L，注意称量时用电子分析天平。配制培养基时，每配1L培养基取此液5ml。 注意：

由于维生素母液营养丰富，因此贮藏时极易染菌。被菌类污染的维生素母液，有效浓度降低，并且易给后期培养造成伤害，不宜再用。避免此现象发生的方法是:配制母液时用无菌重蒸馏水溶解维生素，并贮存在棕色无菌瓶中，或缩短贮藏时间。

表5 MS培养基有机物质母液的制备

序化合物名称 号 1 甘氨酸 （mg/L） 2 (mg) 400 培养基浓度扩大200倍称量

2 肌醇 盐酸硫胺素3 (VB1) 盐酸吡哆素4 (VB6) 5 烟酸 5、激素母液配制

100 0.5 20000 100 0.5 0.5 100 100 植物组织培养中使用的激素种类及含量需要根据不同的研究目的而定。一般激素母液的配制的终浓度以0.5mg/ml为好，需要注意的是： (1)配制生长素类，例如IAA、NAA、2.4-D、6BA，应先用少量95%乙醇或无水乙醇充分溶解，或者用 1mol/L的NaOH溶解，然后用蒸馏水定容到一定的浓度。

(2)细胞分裂素，例如KT，应先用少量95%乙醇或无水乙醇加3~4滴1mol/L的盐酸溶解，再用蒸馏水定容。 (3)配制生物素，用稀氨水溶解，然后定容。