摘要:目的 探讨可溶性血管内皮生长因子受体1(sflt-1)、血管内皮生长因子(VEGF)、核转录因子B(NF-B)p65与子宫内膜异位症(EMs)的关系。方法 选取2015年2月至2016年10月在我院治疗的EMs患者60例(病例组),同时选取正常生育期妇女共60例作为对照组,测定两组血清sflt-1和VEGF水平,同时采用免疫组化法检测EMs患者内膜组织NF-B p65表达。结果 病例组血清sflt-1和VEGF分别为(301.40±84.26)pg/ml和(430.11±98.46)pg/ml,明显高于对照组(p<0.05);r-AFS分期为Ⅲ~Ⅳ期患者血清sflt-1、VEGF以及内膜组织NF-B p65表达分别为(345.35±90.13)pg/ml、(486.70±99.13)pg/ml和
(0.814±0.110),明显高于Ⅰ~Ⅱ期患者(p<0.05);sflt-1、VEGF以及内膜组织NF-B p65表达与r-AFS分期呈正相关(rs=0.633、0.801和0.563,p<0.05);内膜组织NF-B p65表达与患者血清sflt-1和VEGF无相关性(p>0.05)。结论 血清sflt-1、VEGF水平以及内膜组织NF-B p65表达与EMs发生发展有一定的关系,值得进一步研究。
关键词:可溶性血管内皮生长因子受体1;血管内皮生长因子;核转录因子B;子宫内膜异位症
The relationship between sflt-1,VEGF,NF- B p65 and the development of EMs [Abstract]Objective:To investigate relationship between soluble vascular endothelial growth factor receptor 1(sflt-1),vascular endothelial growth factor(VEGF),nuclear transcription factor B(NF- B)p65 and endometriosis(EMs). Methods:Selected 60 cases of EMs patients in our hospital from February 2015 to October 2016,and 60 women with normal growth period as control group,ELISA was used to detect serum sFlt-1 and VEGF levels,immunohistochemistry was used to detect the endometrial tissue NF- B p65 expression of patients with EMs. Results:The serum levels of sFlt-1 and VEGF in the case group were(301.40±84.26)pg/ml and(430.11±98.46)pg/ml,significantly higher than those in the control group(P < 0.05);r-AFS stage III ~ IV patients serum sFlt-1,VEGF and endometrial tissues NF- B p65 were(345.35 ±90.13)pg/ml,(486.70±99.13)pg/ml and(0.814±0.110),were significantly higher than that in stage I-II patients(P < 0.05);sFlt-1,VEGF and endometrial tissue NF- B p65 expression was positively correlated with r-AFS(rs=0.633,0.801 and 0.563,P<0.05);Endometrial tissue NF-B p65 expression had no correlation with serum sFlt-1 and VEGF(P > 0.05). Conclusion:There is a certain relationship between the serum sFlt-1,VEGF and endometrial tissue NF-B p65expression and the development of EMs,worth further study.
[Key words] Soluble vascular endothelial growth factor receptor 1;vascular endothelial growth factor;nuclear transcription factor B;endometriosis
子宫内膜异位症(endometriosis,EMs)的发生发展,会导致患者卵巢、输卵管等的破坏,促进患者盆腔慢性疾病的发生。流行病学研究表明,EMS的发病率可达0.7%以上[1]。其中中度或者重度EMs的发生可导致更为严重的临床预后。基础领域的相关研究显示,趋化因子或者生长因子家族相关成员的异常表达,可以通过加剧氧化应激损伤,促进EMs患者异位病灶的侵袭或者临近正常组织的破
坏等,促进EMs的发生发展[2-4]。为了进一步揭示EMs的发病机制,为临床上EMs的预后评估提供理论参考,本研究选取2015年2月至2016年10月在我院治疗的EMs患者60例,探讨了血清中内皮生长因子受体1(soluble vascular endothelial growth factor receptor 1,sflt-1)、血管内皮生长因子(vascular
endothelial growth factor,VEGF)、核转录因子B(nuclear transcription factor B,NF-B)的表达,及其与患者临床分期的关系。 1资料与方法 1.1一般资料
选取2015年2月至2016年10月在我院治疗的EMs患者60例(病例组),纳入标准:(1)均经病理学确诊;(2)入院前3个月为接受过激素类药物治疗;(3)患者及家属知情同意并签署同意书。排除标准:有子宫息肉、子宫内膜非典型性增生等妇科器质性疾病。同时选取正常生育期妇女共60例作为对照组,两组受试者年龄、月经周期、产次等一般资料比较差异无统计学意义(p>0.05),见表1。
1.2检测方法
血清sflt-1和VEGF等的检测:入院后24小时内常规采集患者肘部静脉血3ml,加入抗凝剂2ml,1000rmin离心(离心半径10cm)5min,采用生物酶联免疫吸附实验检测相关指标,sflt-1和VEGF检测试剂盒购自罗氏生物检测应用公司,配套试剂及仪器购自南京伯斯金生物科技有限公司。
内膜组织中NF-B p65等的表达的检测:采用石蜡切片脱蜡至水,切片厚度3mm,3%H 2O2 室温孵育 5 min,采用去离子水冲洗3次,每次3min,采用浓度为10% 牛奶蛋白(1g蛋白加入100ml纯水)封闭,室温孵育 5min,加入抗体(鼠来源,南京碧云天生物科技有限公司),37 ℃ 孵育 2h,PBS缓冲液冲洗3次,每次5min,滴加HRP标记的二抗(兔来源,购自罗氏检测公司),37 ℃ 孵育 30 min,PBS 冲洗3次,每次5min,加入 NBT/BCIP色剂显色 5min,复染,脱水,透明,封片,镜下观察。OLIPICS电子显微镜购自上海精密仪器有限公司,配套试剂购自南京泰康生物科技有限公司。 1.3 r-AFS分期
对EMs患者进行r-AFS分期,内容包括对患者异位病灶和粘连范围进行评分,其中Ⅰ期为1~5分,Ⅱ期为6~15分,Ⅲ期为16~40分,Ⅳ期为>40分,分数越高表面患者症状越重。
1.4统计学处理
采用SPSS19.0进行统计分析,计量资料采用(±s)表示,两组间比较采用t检验;相关性采用Spearman相关或Pearson相关分析。以p<0.05表示差异具有统计学意义。 2结果
2.1 两组血清sflt-1及 VEGF比较
病例组血清sflt-1和VEGF明显高于对照组,差异比较有统计学意义(p<0.05),见表2。
2.3 相关分析
EMs患者血清sflt-1、VEGF以及内膜组织NF-B p65表达与r-AFS分期进行Spearman相关分析,结果显示sflt-1、VEGF以及内膜组织NF-B p65表达与r-AFS分期呈正相关(rs=0.633、0.801和0.563,p<0.05);内膜组织NF-B p65表达与患者血清sflt-1和VEGF无相关性(p>0.05)。 3.讨论
自身性激素敏感性的改变,或由于多次的人工机械性操作损伤病史等,均可促进EMs的发生,特别是在具有慢性盆腔炎症性疾病或者卵巢囊肿的人群中,EMs的发病率更高,可较
正常对照人群上升25%-55%[5]。EMs的发生可以在下列方面影响到患者的生存预后[6,7]:(1)EMs破坏了卵巢上皮生发层,其对于卵母细胞或者生发细胞的破坏,可以加剧卵巢功能的衰退;(2)中度或者重度的EMs患者,其盆腔特别是后腹膜、直肠及膀胱的粘连较为严重,长期的慢性盆腔疼痛严重影响到了患者的生活质量。一项汇集了324例中度EMs患者的临床治疗随访研究显示,EMs治疗后的总体有效率不高,病情复发率可达25%以上,且患者的自主性疼痛感受等并无明显改善。而通过对EMs发病过程中相关生物学机制的研究,一方面可以为EMs的综合性生物治疗提供靶点,同时可以为如何降低EMs治疗后的复发率提供参考。
VEGF是血管内皮生长因子家族成员,其对于血管内皮细胞受体sflt-1的高特异度的结合作用,可以促进子宫内膜异位症病灶组织中细胞的高血流灌注,提高了病灶细胞的侵袭能力,促进了子宫内膜腺体等间质成分对于卵巢或者输卵管的浸润[8,9];NF-B介导的信号通路,能够在影响炎症因子的表达、诱导局部氧化应激反应等方面发挥作用,NF-B的表达上调在影响异位症病灶细胞微环境的基础上,促进了EMs的盆腔组织的破坏[10,11]。
本次研究发现,EMs患者血清中的sflt-1和VEGF等指标均明显高于正常对照人群,上升幅度较为明显,提示sflt-1和VEGF可能参与到了EMs的发生发展过程中,sflt-1和VEGF等的上升能够影响到异位症病灶中子宫内膜腺体细胞的侵袭活力,增加内异症病灶组织中的炎症性因子的表达,促进患者病灶对于腹膜上皮或者其他盆腔正常组织的浸润。孙莹等[12,13]研究者在探讨EMs患者血清中相关趋化因子或者生长因子表达的过程中发现,重度EMs患者的血清中VEGF可平均上升25%-65%,且患者的病程越长、临床分期越晚,VEGF的表达越高,患者的临床预后越差。在探讨不同的r-AFS分期患者血清中相关因子表达的过程中,可以明显地发现r-AFS分期越高,VEGF或者sflt-1的表达越高,趋势较为明显,提示sflt-1和VEGF与子宫内膜异位症患者的病情具有较为密切的关系,从机制上考虑sflt-1和VEGF促进患者r-AFS分期进展的原因,考虑可能与下列因素有关:(1)sflt-1可以通过诱导子宫内膜异位症腺体细胞的异常分化,导致其对于盆腔组织的破坏出血、子宫直肠陷凹的粘连等病理过程持续性进展;(2)VEGF的上升,能够影响到新生血管的形成,促进异位症病灶组织细胞的血流供应,加剧病灶的增殖活性。但需要注意的是,陆丹等[14]研究者的研究中并未发现VEGF在不同临床分期或者r-AFS分期中的表达差异,这与本研究的结论存在一定的差别,考虑到子宫内膜异位症患者的病情差异、入组患者的血清学检测方法的不统一等,均可能导致了相关结论的差异。最后,本研究发现sflt-1、VEGF以及内膜组织NF-B p65表达与r-AFS分期呈正相关,相关性较为明显,进一步提示了sflt-1和VEGF与患者病情的关系。
综上所述,血清sflt-1、VEGF水平以及内膜组织NF-B p65表达与EMs发生发展有一定的关系,相关生物学因子的表达与患者病情的关系研究,可以为后续临床治疗提供新的思路。
参考文献:
[1]Kianpour M N M A S. Serum and peritoneal fluid levels of vascular endothelial growth factor in women with endometriosis.[J]. Int J Fertil Steril,2013,7(2):96-99.
[2]田晓迎,董薇. 子宫内膜异位症不孕轻型表现患者腹腔镜联合活血化瘀中药对VEGF和IGF-1的影响研究[J]. 中国妇幼保健,2014,29(19):3112-3114.
[3]刘志敏,申艳梅,刘素巧,等. 血管内皮生长因子在子宫腺肌病患者内膜-肌层界面的表达[J]. 天津医药,2013,41(09):928-929.
[4]武生梅,史淑红,李艳芳,等. 异位子宫内膜组织间质细胞培养液中VEGF、sflt-1表达及意义[J]. 山东医药,2015,55(06):40-41.
[5]Vodolazkaia A Y B K C. Vascular endothelial growth factor pathway in endometriosis:genetic variants and plasma biomarkers.[J]. Fertil Steril,2016,105(4):988-996.
[6]丁辉,马彩玲. 新疆汉族和少数民族子宫内膜异位症患者血清和腹腔液VEGF、TNF-α和IL-6的表达及相关因素分析[J]. 中国现代医学杂志,2015,25(09):47-50.
[7]马悦,李妍,刘岿然,等. 子宫内膜异位症异位及在位内膜EG-VEGF基因表达及意义[J]. 中国实用妇科与产科杂志,2015,31(04):332-335.
[8]Cardoso Jv A M V R. Combined effect of vascular endothelial growth factor and its receptor polymorphisms in endometriosis:a case-control study.[J]. Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol,2017(05):25-33.
[9]Zhang L X W X Y. 17 β-Estradiol promotes vascular endothelial growth factor expression via the Wnt/β-catenin pathway during the pathogenesis of endometriosis.[J]. Mol Hum Reprod,2016,22(7):526-535.
[10]王春红,魏静波,曲银娥,等. 血管内皮生长因子及其受体在子宫内膜异位症中的表达和意义[J]. 中国免疫学杂志,2013,29(06):605-609.
[11]叶青,马楠. 细胞跨膜Notch配体4和血管内皮生长因子蛋白在子宫内膜异位症组织中的表达及意义[J]. 重庆医科大学学报,2014,39(05):691-693.
[12]凌艳,刘阳. 子宫内膜异位症中血管内皮生长因子、血管生成素-2与微血管密度的表达及临床意义[J]. 中国妇幼保健,2014,29(02):191-193.
[13]孙莹,戴辉华. 血管内皮生长因子的调控因素在子宫内膜异位症中的作用[J]. 江苏医药,2013,39(11):1331-1333.
[14]陆丹,贺青蓉,秦炜,等. 组织因子和血管内皮生长因子在子宫内膜异位症组织中的表达及意义[J]. 广东医学,2015,36(12):1863-1865.
因篇幅问题不能全部显示,请点此查看更多更全内容